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抗原抗體反應原理特點歸納總結!實驗人看過來!
點擊次數(shù):495 更新時間:2022-10-08

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內進行,也可以在機體外進行??乖贵w反應的過程是經過一系列的化學和物理變化,包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段,以及由親水膠體轉為疏水膠體的變化。

由于抗體主要存在于血清中,在抗原或抗體檢測中多以血清為試驗材料,故將體外抗原抗體的免疫學反應也稱作血清學反應(serological reaction)。該反應既可用已知的抗原檢測未知的抗體,這是臨床上常用的血清學診斷方法;也可用已知的抗體檢測未知的抗原,如微生物及其代謝產物、激素、藥物鑒定等的檢測。

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抗原抗體反應反應特點


抗原抗體反應的特點主要有四性:即特異性、比例性、可逆性,階段性。

特異性: 是抗原抗體反應的最主要特征,這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間結構的互補性確定的。這種高度的特異性在傳染病的診斷與防治方面得到有效的應用。隨著免疫學技術的發(fā)展進步,還將在醫(yī)學和生物學領域得到更加深入和廣泛的應用,比如腫瘤的診斷和特異性治療等。

比例性: 是指抗原與抗體發(fā)生可見反應需遵循一定的量比關系,只有當二者濃度比例適當時才出現(xiàn)可見反應,在抗原抗體比例相當或抗原稍過剩的情況下,反應最*,形成的免疫復合物沉淀最多、最大。而當抗原抗體比例超過此范圍時,反應速度和沉淀物量都會迅速降低甚至不出現(xiàn)抗原抗體反應。

可逆性: 是指抗原抗體結合形成復合物后,在一定條件下又可解離恢復為抗原與抗體的特性。由于抗原抗體反應是分子表面的非共價鍵結合,所形成的復合物并不牢固,可以隨時解離,解離后的抗原抗體仍保持原來的理化特征和生物學活性。

階段性:抗原抗體反應可分為兩個階段,第一個階段為抗原抗體的特異性結合階段,此階段是抗原與抗體間互補的非共價結合,反應迅速,可在數(shù)秒鐘至數(shù)分鐘內完成,一般不出現(xiàn)肉眼可見的反應現(xiàn)象。第二個階段為可見反應階段,是小的抗原抗體復合物間靠正、負電荷吸引形成較大復合物的過程。此階段反應慢,需要時間從數(shù)分鐘、數(shù)小時至數(shù)日不等,且易受多種因素和反應條件的影響 。

抗原抗體反應影響因素


電解質:抗原和抗體通常為蛋白質分子,等電點分別為pH 3~5和pH 5~6,在中性或:弱堿性的環(huán)境中,表面均帶負電荷,適當濃度的電解質會使他們失去一部分負電荷而相互結合,出現(xiàn)肉眼可見的凝集或沉淀現(xiàn)象:在抗原抗體反應中,常用0.85%的NaCI溶液或各種緩沖液作為抗原、抗體的稀釋液,以提供適當濃度的電解質。

溫度:抗原抗體反應必須在適宜的溫度中進行,一般為15~40℃,通常最適為37℃。一定范圍內,溫度升高,可促進抗原抗體分子問的碰撞機會,加速抗原抗體復合物的形成,加快可見反應的速度,若溫度高于56℃,可導致已結合的抗原抗體再解離,甚至變性或破壞;溫度越低,結合速度越慢,但結合牢固,易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應,對反應溫度有特殊要求,如冷凝集素在4℃左右與紅細胞結合最好,20℃以上反而解離。

酸堿度:抗原抗體反應必須在合適的酸堿度環(huán)境中進行,pH過高或過低都將影響抗原:抗體的理化性質,抗原抗體反應的最適酸堿度為pH 6~8。此外,當pH達到或接近顆粒性抗原的等電點時,即使沒有相應抗體存在時,也會引起抗原非特異性凝集,即自凝,造成假陽性反應,嚴重影響試驗的可靠性。

抗原抗體反應反應原理

抗體能特異性地識別相應的抗原,并與之結合。這種結合在體外也能發(fā)生,這種特性就是許多免疫檢測方法的基礎??乖c抗體相互作用是非共價的,可逆的,其特性符合許多化學反應的基本原理。但因為抗體分子的結構特點,以及抗原分子結構的多樣性,使抗原抗體結合反應表現(xiàn)出復雜性 。

交叉反應

抗體特異性與交叉反應:抗體是特異的。只與相應抗原反應。實際制備的抗體卻常有非特異性反應,這是因為抗原不純造成的。多組分抗原之間存在共同的抗原決定簇,或者兩個抗原決定簇結構類似能與同一抗體結合,均可出現(xiàn)抗體與異源抗原的交叉反應。用瓊脂雙擴散能簡便直觀地反映不同抗原與同一抗血清,或不同抗血清與同一抗原的交叉反應。

抗原抗體反應應用

抗原:免疫動物是制備抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、細菌或者其他蛋白質抗原,如果使用半抗原如小分子激素等,必須與大分子載體連接。抗原的用量視抗原種類及動物而異,—次注射小鼠可以少至幾個微克,免、羊甚至更大的動物每次注射的量就相應增加,從幾百μg/次至幾mg/次。

佐劑及乳化:佐劑可以幫助抗原在注射部位緩慢釋放,以增加免疫刺激的效果。佐劑有*和不*佐劑之分。*佐劑加有滅活的分枝桿菌(如卡介苗)或棒狀桿菌。福氏佐劑可從試劑公司購買,也可用羊毛脂和石蠟油按1:2—4混合自行制備。佐劑與抗原按1:1的比例混合乳化為均勻的乳液,放置后不會發(fā)生油水分離。

免疫動物:常用于制備抗血清的動物如豚鼠、家兔、小鼠、大鼠等,如果大量生產可用動物羊、馬等,動物接受免疫的乳液量小鼠為1.0—2.0 mL,家兔為2—4mL??乖庖邉游锏耐緩饺Q于動物種類、抗原特性和是否使用佐劑。腹腔注射(i.p),肌肉注射(i.m),皮內注射(i.d.)和皮下注射(s.c.)適合于任何抗原,這些途徑主要刺激局部淋巴結發(fā)生免疫應答,初次免疫和免疫加強注射均可使用。靜脈注射(i.v.)則只適合于可溶性抗原及分散的單細胞懸液,且不能使用佐劑,其誘發(fā)的免疫應答主要發(fā)生在脾臟。此外,在單克隆抗體制備時,亦可用脾臟直接注射或體外免疫方法,尤其對微量抗原比較實用。體外免疫方法也常用于人源單克隆抗體的制備。體外免疫時將脾細胞或外周血淋巴細胞(包括B細胞,T細胞及抗原遞呈細胞)與抗原一起作體外培養(yǎng),然后再與骨髓瘤細胞融合。初次免疫后要經過2—3次以上的免疫加強以保證能形成較高水平的IgG抗體。兩次免疫注射之間的時間間隔,一般3—4周比較適合大部分動物,小動物可間隔10—14d,大動物則在2月左右。在免疫加強最后一次注射后的一周內采集抗血清,可獲得高水平的抗體 。

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