引物定量不準(zhǔn),出現(xiàn)這種情況的可能性有:
(1)定量錯誤、分裝錯誤、引物抽干或收樣過程中意外丟失。這種可能性有,但是很少,因?yàn)樽鳛閷I(yè)的引物合成公司,生產(chǎn)人員都是經(jīng)過嚴(yán)格的專業(yè)培訓(xùn),這種錯誤是要求謹(jǐn)慎避免甚至杜絕的。一般情況下,引物都有留樣備份,接到用戶投訴后,都會找出留樣重新定量,一般都沒有問題,如確實(shí)存在問題,則可安排重新準(zhǔn)備一份。
(2)系統(tǒng)誤差,我們認(rèn)為10%左右為允許誤差。使用過程中,引物工作濃度范圍很寬,定量上的少許偏差不影響實(shí)驗(yàn)。
(3)用戶收到引物干粉時(shí),打開引物管蓋前沒有離心或其他誤操作導(dǎo)致引物干粉部分丟失。
(4)用戶沒有能夠正確理解引物OD數(shù)的含義,沒有能夠正確使用分光光度計(jì),特別是使用微量測定;用戶沒有將OD讀數(shù),正確地轉(zhuǎn)換成母液中OD數(shù)。這種情況比較常見。
例如,驗(yàn)證標(biāo)2OD引物量是否準(zhǔn)確,簡單的做法是:加入1ml水,徹di溶解混勻后,取100ul,加入900ul水,用光徑為1cm的石英比色杯,波長260nm,此時(shí)光吸收的讀數(shù)為0.2。