pUC18 和 pUC19質(zhì)粒圖譜
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最/常用的質(zhì)粒載體，其結(jié)構(gòu)組成緊湊，幾乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注冊號為 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而來，其中 lacZ (MSC)來自 M13mp18/19 圖 3-4 是其質(zhì)粒圖譜 。
這兩個質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)幾乎是完/全一樣的，只是多克隆位點(diǎn)的排列方向相反。這些質(zhì)粒缺乏控制拷貝數(shù)的 rop 基因，因此其拷貝數(shù)達(dá) 500-700 。 pUC 系列載體含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分編碼序列，在特定的受體細(xì)胞中可表現(xiàn) α-互補(bǔ)作用。因此在多克隆位點(diǎn)中插入了外源片段后，可通過 α-互補(bǔ)作用形成的藍(lán)色和白色菌落篩選重組質(zhì)粒。
特征序列區(qū)位：
&NBS p;
pBR322_origin &NBS p; 1471 - 852
Ampicillin 2486 - 1626
lac_promoter 543 - 514
AmpR_promoter 2556 - 2528
M13_pUC_rev_primer 500 - 478
M13_reverse_primer 479 - 461
M13_forward20_primer 379 - 395
M13_pUC_fwd_primer 364 - 386
lacZ_a 398 - 250
pGEX_3_primer 51 - 29
Orf2 2486 - 1626
NOS terminator sequence:
ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat
設(shè)計引物：
Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位點(diǎn)GGATCC及三個保護(hù)堿基)
Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位點(diǎn)GAATTC及三個保護(hù)堿基)
請查一下NOS終止子序列內(nèi)有沒有這兩個酶切點(diǎn)。如果沒有，引物合成后，以任何一種pCAMBIA為模板都能擴(kuò)增到該終止子序列。
