在《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實驗室管理辦法》,《三級綜合醫(yī)院評審標(biāo)準(zhǔn)(2011 年版)》等文件中,都指出在臨床檢測報告的項目均應(yīng)開展內(nèi)部室內(nèi)質(zhì)控,并參加外部室間質(zhì)評。在這兩項工作當(dāng)中,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的作用尤為重要,對它的管控不可/或缺。
(一) 、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(質(zhì)控品)的來源與基本條件
分子實驗室中,一般將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分成兩類:
1、用于儀器校準(zhǔn)、驗證、測試和繪制工作標(biāo)準(zhǔn)曲線等目的的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì);(一般是由廠商提供的質(zhì)控品)
2、用于外部室間質(zhì)評、內(nèi)部室內(nèi)質(zhì)控、方法驗證等目的的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),而在《2021 臨床醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)(士)》的中,這類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)又分為標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品。(一般為第三方提供的標(biāo)準(zhǔn)品、實驗室自制質(zhì)控品。)對于這類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的要求,結(jié)合 GB/T 20468-2006《臨床實驗室定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制指南》,整理如下:
① 基質(zhì):應(yīng)盡可能與臨床樣本的基質(zhì)相似或一樣,不同基質(zhì)中可能含有不*一致的基因擴(kuò)增檢測抑制物,應(yīng)對測定結(jié)果無影響。
② 濃度:在測定范圍內(nèi),質(zhì)控品要求其所含待測物的濃度盡可能接近試驗或臨床決定性水平。
③ 具備均勻性和穩(wěn)定性,瓶間變異性應(yīng)小于分析系統(tǒng)的變異,在規(guī)定的條件下有良好的穩(wěn)定性。
④ 靶值或預(yù)期結(jié)果已知。
⑤ 無已知的生物傳染危險。
⑥ 可單批大量獲得,因室內(nèi)質(zhì)控是連續(xù)測定同一質(zhì)控品,以監(jiān)測實驗室測定的重復(fù)性(可大量持續(xù)供應(yīng))。
(二) 、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(質(zhì)控品)的驗收與保存
1、參照 JJF 1507-2015 《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇與應(yīng)用技術(shù)規(guī)范》(以下簡稱「JJF1507-2015」)有相關(guān)描述,整理如下:
在接收標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時,應(yīng)對照提供的說明確認(rèn)其運輸條件和接收狀態(tài),并立即按照說明規(guī)定的保存條件進(jìn)行保存,并在保質(zhì)期內(nèi)使用(參考 JJF1507-2015 10.1.1、10.1.3)。對于核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),在《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室工作導(dǎo)則》的“臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項"中提到“試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)。試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū),應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。
2、對于可多次使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),確保包裝單元開封后的恰當(dāng)保存和包裝、標(biāo)簽、說明規(guī)定的完整性非常重要,必要時,應(yīng)對剩余的物質(zhì)進(jìn)行重新密封包裝(參考 JJF1507-2015 10.1.2、10.2.4)。
3、對于僅供一次使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),在打開包裝后應(yīng)按照要求盡快使用,不能留存后反復(fù)使用(參考 JJF1507-2015 10.1.3)。
(三)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用
參照 JJF1507-2015 有使用方面的相關(guān)描述,整理如下:
1、使用前準(zhǔn)備:
在規(guī)定的程序條件和測量條件達(dá)到穩(wěn)定后,使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),否則將造成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的誤用,并可能產(chǎn)生錯誤的結(jié)論(參考 JJF1507-2015 10.2.1、10.2.5)
2、預(yù)處理
對于需通過混合、稀釋、分裝等預(yù)處理后的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),需要對不確定度的來源進(jìn)行控制,如溶質(zhì)或溶劑的揮發(fā)性損失、包裝和環(huán)境,還有測定方法、緩沖液、最終結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)評價和質(zhì)量控制等。為確保特性值的正確傳遞,避免預(yù)處理過程因素的影響,建議對預(yù)處理進(jìn)行驗證評估,必要時建立不確定度評估程序,以確保不確定度的合理量化。(參考 JJF1507-2015 6.3.3、10.2.6、《2021 臨床醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)(士)》)
注:ISO 指南 34 和 35 對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性評估進(jìn)行了詳細(xì)闡述,上述兩份指南已轉(zhuǎn)化為國家計量技術(shù)規(guī)范 JJF1342《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制(生產(chǎn))機(jī)構(gòu)通用要求》和 JJF1343《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理》,同時,在體外診斷試劑方面有發(fā)布 YY/T 1652《體外診斷試劑用質(zhì)控物通用技術(shù)要求》,均可作為參考文件。
3、取樣
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在取樣時應(yīng)確保代表性,如果規(guī)定了取樣之前必要的均勻化措施,如混勻等,應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行。
如果規(guī)定了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的最小取樣量,那么使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時的實際取樣量應(yīng)不低于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的最小取樣量,當(dāng)小于最小取樣量時,其特性值和不確定度等參數(shù)可能會由于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不均勻性而不再有效。(參考 JJF1507-2015 10.2.2),取樣時應(yīng)采取防止污染的措施(參考 JJF1507-2015 10.2.4)
對于核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用,還需注意:
(1)對于液體狀態(tài),在開蓋前離心以防產(chǎn)品損耗,并按照說明中的稀釋、分裝建議進(jìn)行操作。
(2)對于石蠟切片(如 FFPE),應(yīng)對核酸提取步驟,應(yīng)建立技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、操作與質(zhì)控規(guī)程并保存過程記錄。
(3)凍干狀態(tài)的核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的在進(jìn)行復(fù)溶時,所加溶劑的量要準(zhǔn)確,每次加入的量盡量一致,應(yīng)輕輕搖勻,使內(nèi)容物*溶解,切忌劇烈振搖。
4、使用
對于定性檢測,通常有弱陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品可以滿足要求。
對于定量檢測,則要根據(jù)實驗的測定范圍。使用陽性不但可檢測擴(kuò)增反應(yīng)液的質(zhì)量,還可獲得檢測試劑的檢測的下限信息。使用陰性主要目的是監(jiān)測污染,包括實驗室以前的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染、有實驗操作所致的標(biāo)本之間的交叉污染、擴(kuò)增反應(yīng)試劑的污染等。