一、細(xì)菌生長繁殖的條件
細(xì)菌生長繁殖除需必要的營養(yǎng)物質(zhì)外還需有適宜的環(huán)境,包括溫度、酸堿度及氣體等。
1、充足的營養(yǎng) 細(xì)菌的生長繁殖、新陳代謝必須有充足的營養(yǎng)物質(zhì)才能提供其菌體所需的原料及能量。
2、適宜的溫度 不同細(xì)菌對溫度的要求不同,據(jù)此可分為嗜冷菌、嗜溫菌、嗜熱菌三種類型。病原菌均為嗜溫菌,多數(shù)病原菌最適生長溫度為35~37℃,少數(shù)病原菌如小腸結(jié)腸炎耶爾森菌最適溫度為20~28℃,空腸彎曲菌最適溫度為36~43℃。
3、適宜的酸堿度 各類一細(xì)菌對于生長環(huán)境中氫離子的濃度要求不同,多數(shù)在中性至弱堿性環(huán)境中酶活性高,生長良好,多數(shù)病原菌最適pH值范圍為7.2~7.6,個別細(xì)菌如結(jié)核分枝桿菌最適pH值范圍為6.5~6.8(偏酸性),霍亂弧菌最適pH值范圍為8.4~9.2(偏堿性)。因細(xì)菌在生長繁殖過程中可分解糖類產(chǎn)酸,使周圍環(huán)境的pH值下降,故人工培養(yǎng)細(xì)菌時應(yīng)加入緩沖劑,防止培養(yǎng)基酸堿度發(fā)生變化影響分離培養(yǎng)。
4、適宜的氣體細(xì)菌生長繁殖時所需的氣體主要是二氧化碳和氧氣。多數(shù)細(xì)菌在其代謝過程中所產(chǎn)生的CO2即可滿足本身需求,只有少數(shù)細(xì)菌如奈瑟菌、流感嗜血桿菌等在初次分離培養(yǎng)時需提供5%~10%CO2才能生長。根據(jù)細(xì)菌對氧分子的需求,將其分為以下幾種。
⑴專性需氧菌(obligate aerobe)一類必須在有氧的環(huán)境中才能生長的細(xì)菌,具有完善的呼吸酶系統(tǒng),以氧分子作為氫受體進(jìn)行有氧呼吸。如結(jié)核分枝桿菌、炭疽芽胞桿菌等。
?、莆⑿柩蹙╩icroaerophilic bacterium)一類在低壓氧(5%~6%)環(huán)境中生長zui hao,氧濃度大于10%時生長被抑制的細(xì)菌。如空腸彎曲菌、幽門螺桿菌等。
⑶兼性厭氧菌(facultative anae-obe)一類在有氧或無氧環(huán)境中均能生長的細(xì)菌,在無氧環(huán)境中進(jìn)行無氧發(fā)酵,在有氧環(huán)境中進(jìn)行需氧呼吸,不同環(huán)境中所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物不同。多數(shù)病原菌屬此類。
?、葘P詤捬蹙╫bligate anaerobe)一類只能在無氧環(huán)境中才能生長的細(xì)菌,缺乏完善的呼吸酶系統(tǒng),只能進(jìn)行無氧酵解,因游離氧對其有毒性作用,在有氧時生長受抑制甚至死亡。如破傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌等。
二、細(xì)菌個體的生長繁殖
細(xì)菌以二分裂(binary fission)方式進(jìn)行無性繁殖。當(dāng)細(xì)菌生長到一定時間后細(xì)胞體積增大,染色體復(fù)制,細(xì)胞膜內(nèi)陷或新合成橫隔,將細(xì)胞新染色體分隔在兩側(cè),新合成的細(xì)胞壁沿橫隔生長將細(xì)胞分裂成兩個子代細(xì)胞。球菌可沿不同平面分裂形成雙球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌或葡萄球菌,桿菌沿橫隔分裂,分枝桿菌可通過分枝方式分裂成子代細(xì)菌。
細(xì)菌每分裂一次所需的時間稱為代時(generation time),多數(shù)細(xì)菌在條件適宜時代時為20~30 min,個別細(xì)菌繁殖速度較慢 ,如結(jié)核分枝桿菌的代時為12~24 h。
三、細(xì)菌群體的生長繁殖
假設(shè)細(xì)菌代時為20 min,在生長繁殖條件適宜時,一個細(xì)菌經(jīng)10h繁殖的數(shù)量可達(dá)10億以上,24 h后則達(dá)到驚人的數(shù)量。但實際上隨著營養(yǎng)物質(zhì)的消耗,毒性代謝產(chǎn)物的積累,環(huán)境酸堿度的改變,細(xì)菌并不能始終保持如此高的速度而無限制繁殖。將一定數(shù)量的活菌接種于適宜的培養(yǎng)基中,置于適宜環(huán)境培養(yǎng),以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo),以活菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標(biāo),可得出一條反映細(xì)菌生長繁殖規(guī)律的曲線,稱為生長曲線(growth curve)。
根據(jù)細(xì)菌生長曲線的特點,將細(xì)菌生長繁殖過程分為四個期,即遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。
1、遲緩期(lag phase)接種于培養(yǎng)基1~4 h后,細(xì)菌并不立即分裂繁殖,而是為分裂做準(zhǔn)備,菌體增大、代謝活躍,合成新的細(xì)胞成分。此期是細(xì)菌進(jìn)入新環(huán)境后的適應(yīng)期。遲緩期時間長短與細(xì)菌本身特性、培養(yǎng)基性質(zhì)及所處環(huán)境有關(guān)。
2、對數(shù)期(logarithmic phase)對數(shù)期又稱指數(shù)期,出現(xiàn)于細(xì)菌培養(yǎng)后的8~18 h。此期細(xì)菌分裂繁殖迅速,活菌數(shù)以幾何級數(shù)增長至峰值。對數(shù)期細(xì)菌形態(tài)、大小、染色性、生理活性等較典型,對外界環(huán)境因素敏感,適用于研究細(xì)菌的生物學(xué)特性、耐藥性等。
3、穩(wěn)定期(stationary phase)因?qū)?shù)期消耗了大量營養(yǎng)物質(zhì),產(chǎn)生了多種代謝產(chǎn)物,從而導(dǎo)致毒性產(chǎn)物聚積、培養(yǎng)基pH值下降,使得細(xì)菌分裂繁殖速度減緩,死亡菌數(shù)增加與活菌數(shù)處于動態(tài)平衡。此期細(xì)菌形態(tài)、染色性、生理特性等發(fā)生改變。由于代謝產(chǎn)物大量積聚,故提取外毒素、抗生素等細(xì)菌代謝產(chǎn)物多選擇在穩(wěn)定期。芽胞也多在此期形成。
4、衰亡期(decline phase)隨著培養(yǎng)基生長環(huán)境越來越惡劣,死亡菌數(shù)逐漸多于活菌數(shù),細(xì)菌發(fā)生變形甚至自溶,生理代謝也逐漸趨于停滯。此期細(xì)菌難以鑒定。
A~B:遲緩期;B~C:對數(shù)期;C~D:穩(wěn)定期;D~E;衰亡期
了解細(xì)菌生長曲線有助于人們培養(yǎng)細(xì)菌、研究和利用細(xì)菌。例如鑒定細(xì)菌及做藥敏試驗宜選用對數(shù)期細(xì)菌,培養(yǎng)益生菌時應(yīng)及時補充營養(yǎng),以利于其快速生長繁殖。